糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)的严重并发症之一。随着糖尿病发病率的增加,DN患者日益增多,因其发病隐蔽,进展缓慢,如果任其发展,肾脏会出现不可逆的病变,再用药物也无法逆转。因此,早期发现糖尿病肾病有其十分重要的意义。尿病肾病的早期实验诊断方法包括尿微量白蛋白检测、尿铜蓝蛋白检测和尿白蛋白片段的检测三种方法,现简要介绍尿白蛋白片段的检测方法。
尿白蛋白片段的检测:
(一)方法:免疫印迹法。
(二)实验步骤:
1、尿样与样品处理液等量混合,置沸水浴3分钟;
2、聚丙烯酰胺凝胶电泳,每孔加样20μι,电压200V;
3、将胶上的蛋白带转印到硝基纤维素膜上,转印电流340mA,2小时后取出,封闭1小时;
4、加入白蛋白抗体和酶标白蛋白,冰箱过夜。5、加入显色液,出现蛋白带为阳性,未见蛋白带为阴性。
(三)结论:
通过实验得出凡是尿白蛋白阳性者,尿白蛋白片段也为阳性,而尿白蛋白阴性者中,仍有30%为尿白蛋白片段阳性。曾有人对后者进行随访观察,发现他们中有18%发展为尿白蛋白,蛋白阳性。因此,认为尿白蛋白片段具有更高的特异性和早期栓出率,能更早地发现DN患者。
目前除尿微量白蛋白检测是目前人们较为公认的DN早期诊断指标外,尿铜蓝蛋白检测和尿白蛋白片段的检测两种都还在观察及研究中。应用免疫印迹法分析尿白蛋白片段,可以更有效地避免早期糖尿病肾病的漏诊,是预测肾脏病变的更为早期,更为灵敏的指标。